glutatión
C10H17N3O6S 307,32
Ácido pentanoico, 2-amino-5-[(R)-1-(carboximetilamino)-3-mercapto-1-oxopropan-2-ilamino]-5-oxo, (S);
N-(N-l--Glutamil-l-cisteinil)glicina [70-18-8].
DEFINICIÓN
El glutatión contiene no menos de 98,0% y no más de 101,0% de C10H17N3O6S, como glutatión, calculado sobre la base seca.
IDENTIFICACIÓN
• A. Absorción de infrarrojos<197K>
• B. Rotación óptica, rotación específica<781S>
Solución de muestra: 40 mg/mL en agua
Criterios de aceptación: 15,5° a 17,5°, a 20℃
ENSAYO
• Procedimiento
Muestra: 500 mg de glutatión previamente secado
sistema titrimétrico
(Ver Valorimetría<541>.)
Modo: valoración directa
Valorante: 0,1 N yodo VS
Detección de puntos finales: visual
Blanco: 50 mL de ácido metafosfórico (1 en 50)
Análisis: Disolver la Muestra en 50 mL de ácido metafosfórico (1 en 50) y valorar con el Titulante.
Calcule el porcentaje de glutatión (C10H17N3O6S) en la porción de glutatión tomada:
Resultado = [(V B) × N × F × 100]/W
V = volumen de valorante de la muestra (mL)
B = volumen de valorante del Blanco (mL)
N = normalidad del valorante (mEq/mL)
F = factor de equivalencia, 307,32 mg/mEq
W = peso de la Muestra (mg)
Criterios de aceptación: 98,0%~101,0% en base seca
IMPUREZAS
Impurezas inorgánicas
• Amonio
Solución estándar: 10 µg de amonio de una solución diluida de cloruro de amonio
Solución muestra: 50 mg de Glutatión
Análisis: Transferir la Solución muestra y la Solución estándar a frascos separados de 25-mL equipados con tapas y disolver en 1 mL de agua. Añadir 0,30 g de óxido de magnesio. Cerrar inmediatamente después de colocar un trozo de papel plateado al manganeso de 5-mm cuadrados, humedecido con unas gotas de agua, debajo de los tapones. Agitar evitando proyecciones de líquido y dejar reposar a 40ºC durante 30 min.
Criterios de aceptación: Si el papel plata manganeso presenta un color gris, no es más intenso que el estándar (NMT 200 ppm).
• Arsénico<211>: no más de 2 ppm
• Cloruro y sulfato, cloruro<221>: disolver 0,7 g con agua para obtener 15 ml. La solución no presenta más cloruro del que corresponde a 0,20 ml de ácido clorhídrico 0,020 N (no más de 200 ppm).
• Cloruro y sulfato, sulfato 221: disolver 0,8 g en agua para obtener 15 ml. La solución no presenta más sulfato del que corresponde a 0,25 mL de ácido sulfúrico 0,020 N (no más de 300 ppm).
• Metales pesados, Método I<231>: no más de 10 ppm
• Hierro<241>: no más de 10 ppm
• Residuo en la ignición<281>: No más de 0,1%
Impurezas Orgánicas
• Procedimiento
Fase móvil: 6,8 g/L de dihidrogenofosfato de potasio con 2,02 g/L de 1-heptanosulfonato de sodio. Ajustar con ácido fosfórico a un pH de 3,0. Mezclar 970 ml de esta solución con 30 ml de metanol.
Solución de idoneidad del sistema: 0,1 mg/mL de ER 1-Fenilalanina USP, 0,5 mg/mL de ER Glutatión USP y 0,5 mg/mL de ER Ácido ascórbico USP en fase móvil
Solución estándar: 0,01 mg/mL de ER Glutatión USP en fase móvil. [Nota—Esta solución tiene una concentración equivalente al 2,0% de la de la Solución muestra. ]
Solución muestra: 50 mg de glutatión en 100 mL de Fase móvil. [Nota: Deje reposar la solución durante 5 minutos antes de usarla. ]
sistema cromatográfico
(Consulte Cromatografía<621>, Idoneidad del sistema).
Modo: LC
Detector: UV 210 nm
Columna: 4,6-mm × 15-cm; 5-μm empaquetadura L1
Temperatura de la columna: 30
Caudal: Ajustar para que el tiempo de retención del glutatión sea de aproximadamente 5 min.
Tamaño de la inyección: 10 µL
Idoneidad del sistema
Ejemplo: solución de idoneidad del sistema
Requisitos de idoneidad
Resolución: No menos de 5,0 entre los picos de ácido ascórbico y glutatión; y no menos de 5,0 entre los picos de glutatión y l-fenilalanina
Desviación estándar relativa: no más de 1,5% para inyecciones repetidas
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcule el porcentaje de cualquier impureza en la porción de glutatión tomada:
Resultado = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU = respuesta del pico de cualquier pico de la Solución muestra que no sea glutatión
rS = respuesta del pico de glutatión de la Solución estándar
CS = concentración de ER Glutatión USP en la Solución estándar (mg/mL)
CU = concentración de Glutatión en la Solución muestra (mg/mL)
Criterios de aceptación
Impureza individual: No más de 1,5 % para la impureza con un tiempo de retención relativo de aproximadamente 4
Impurezas totales: no más de 2,0%
PRUEBAS ESPECÍFICAS
• Claridad y color de la solución
Solución de muestra: 0,1 g/mL en agua
Análisis: Utilizando tubos idénticos de vidrio neutro, transparente, incoloro, de base plana y diámetro interior de 15-25 mm, comparar el líquido a examinar con agua, siendo la profundidad de la capa de 40 mm. Compare los colores bajo luz diurna difusa, viéndolos verticalmente sobre un fondo blanco.
Criterios de aceptación: La solución es transparente e incolora.
• Pérdida por secado<731>: No más de 0,5%, 105 ℃ durante 3 h
REQUISITOS ADICIONALES
• Empaque y Almacenamiento: Conservar en recipientes herméticos.
• Estándares de referencia USP<11>
ER Ácido Ascórbico USP
Glutatión USP ER
USP l-ER fenilalanina