SULFATO DE GENTAMICINA
[1405-41-0]
DEFINICIÓN
Mezcla de sulfatos de sustancias antimicrobianas producidas por Micromonospora purpurea, siendo sus principales componentes las gentamicinas C1, C1a, C2, C2a y C2b.
Contenido: mínimo 590 UI/mg (sustancia anhidra).
PERSONAJES
Aspecto: polvo higroscópico blanco o casi blanco.
Solubilidad: fácilmente soluble en agua, prácticamente insoluble en etanol (96 %).
IDENTIFICACIÓN
Primera identificación: B, C.
Segunda identificación: A, C.
A. Cromatografía en capa fina (2.2.27).
Solución de prueba. Disolver 25 mg de la sustancia a examinar en agua R y diluir a 5 ml con el mismo disolvente.
Solución de referencia. Disolver el contenido de un vial de sulfato de gentamicina CRS en agua R y diluir a 5 ml con el mismo disolvente.
Placa: placa de gel de sílice TLC R.
Fase móvil: la capa inferior de una mezcla de volúmenes iguales de amoníaco concentrado R, metanol R y cloruro de metileno R.
Aplicación: 10 μL.
Desarrollo: más de 2/3 del plato.
Secado: al aire.
Detección: rociar con solución de ninhidrina R1 y calentar a 110 ℃ durante 5 min.
Resultados: los 3 puntos principales del cromatograma obtenido con la solución de prueba son similares en posición, color y tamaño a los 3 puntos principales del cromatograma obtenido con la solución de referencia.
B. Examinar los cromatogramas obtenidos en la prueba de composición.
Resultados: el cromatograma obtenido con la solución de prueba (b) muestra 5 picos principales que tienen los mismos tiempos de retención que los 5 picos principales en el cromatograma obtenido con la solución de referencia (a).
C. Da la reacción (a) de sulfatos (2.3.1).
PRUEBAS
Solución S. Disolver 0,8 g en dióxido de carbono-agua libre R y diluir a 20 ml con el mismo disolvente.
Aspecto de la solución. La solución S es transparente (2.2.1) y no tiene un color más intenso que la intensidad 6 del rango de soluciones de referencia del color más apropiado (2.2.2, Método II).
pH (2.2.3): 3,5 a 5,5 para la solución S.
Rotación óptica específica (2.2.7): + 107 a + 121 (sustancia anhidra).
Disolver 2,5 g en agua R y diluir a 25,0 ml con el mismo disolvente.
Composición. Cromatografía líquida (2.2.29): utilizar el procedimiento de normalización teniendo en cuenta únicamente los picos debidos a las gentamicinas C1, C1a, C2, C2a y C2b.
Solución de prueba (a). Disolver 25,0 mg de la sustancia a examinar en la fase móvil y diluir a 25,0 mL con la fase móvil.
Solución de prueba (b). Diluir 5,0 ml de solución de prueba (a) a 25,0 ml con la fase móvil.
Solución de referencia (a). Disolver 5 mg de gentamicina para la identificación del pico CRS (que contiene impureza B) en la fase móvil y diluir a 25 ml con la fase móvil.
Solución de referencia (b). Disolver 20,0 mg de sulfato de sisomicina CRS (impureza A) en la fase móvil y diluir a 20,0 mL con la fase móvil.
Solución de referencia (c). Diluya 1,0 ml de solución de referencia (b) a 100,0 ml con la fase móvil.
Solución de referencia (d). A 1 ml de solución de referencia (b), agregue 5 ml de solución de prueba (a) y diluya a 50 ml con la fase móvil.
Columna:
- tamaño: l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm;
- fase estacionaria: gel de sílice octadecilsililo para cromatografía R (5 μm);
- temperatura: 35 ℃.
Fase móvil. A 900 mL de dióxido de carbono-agua libre R, agregue 7,0 mL de ácido trifluoroacético R, 250,0 μL de ácido pentafluoropropanoico R y 4,0 mL de carbonato-libre
solución de hidróxido de sodio R, deje que se equilibre y ajuste a pH 2,6 usando una solución de hidróxido de sodio libre de carbonato R diluida de 1 a 25. Agregue 15 mL de acetonitrilo R y diluya hasta
1000,0 mL con dióxido de carbono-agua libre R.
Caudal: 1,0 ml/min.
Solución postcolumna: solución de hidróxido de sodio libre de carbonatos R diluida de 1 a 25, previamente desgasificada, que se agrega sin pulso al efluente de la columna mediante un serpentín de mezcla polimérico de 375 μL.
Caudal de la solución post-columna: 0,3 ml/min.