Procedimientos de inspección
1. Apariencia
-- Inspección visual
2. Pureza (HPLC)
2.1 Instrumento
Cromatografía líquida de alta resolución, detector PDA.
balanza analítica electrónica
2.2 Reactivo
Acetonitrilo (grado cromatográfico), ácido trifluoroacético (grado cromatográfico)
2.3 Condiciones cromatográficas
2.3.1 Columna: YMC-ODS-AM, 5 µl, 250 x 4,6 mm
2.3.2 Longitud de onda de detección: INC220nm
Caudal: 1,0 ml/min
Tamaño de muestra: 10 μl (referencia)
Diluyente: acetonitrilo
Tiempo de recogida de datos: 25.00min
2.4 Preparación de la fase móvil
Fase móvil A (agua con ácido trifluoroacético al 0,1%): absorción de precisión 2. Diluir Oml de ácido trifluoroacético con agua hasta 2000 m1, mezclar bien y desgasificar;
Fase móvil B (0,1% de ácido acetonitrilo trifluoroacético): absorción precisa Se diluyeron 2,0 ml de ácido trifluoroacético hasta 2000 ml con acetonitrilo, se mezclaron y se desgasificaron;
2.5 Programa de gradiente de fase móvil.
Tiempo (min) A% B%
0.00 90 10
13.00 10 90
18.00 10 90
18.01 90 10
23.00 90 10
2.6 Preparación de la solución de muestra
Pesar y disolver 0,1 g de muestra con acetonitrilo y diluir a 100 ml, agitar bien para su uso o la misma concentración. Prepare dos muestras en paralelo.
2.7 Determinación de la muestra
Analizar la muestra según el siguiente procedimiento de muestreo:
Más de 1 inyección de solución en blanco.
1 solución de muestra de puntada 1#
1 solución de muestra de puntada 2#
2.8 Cálculo del resultado
2.8.1 Se utilizó el método de normalización del área del pico para calcular la pureza de HPLC deduciendo el espacio en blanco.
2.8.2 La desviación media relativa de la pureza de dos agujas no será superior al 1%.
2.8.3 Si los resultados de ambas inyecciones cumplen con los criterios de aceptación, se toma como resultado final la pureza promedio.
3, punto de fusión -- RY-1 instrumento de punto de fusión
4. Método de detección de pérdida por secado.
4.1 Instrumentos:
Horno de secado termostático eléctrico, saldo uno entre diez mil.
4.2 Procedimiento:
En un frasco para pesar plano con tapa bucal esmerilada con peso constante y secado excesivo, pesar 1 gramo de muestra (con una precisión de 0,0001 gramos). La muestra debe esparcirse uniformemente en el fondo de la botella de pesaje con un espesor de no más de 10 mm, colocarse en un horno de secado eléctrico a temperatura constante, secarse a 105-110 ℃ durante 3 horas y luego trasladarse a la sala de secado, enfriarse a temperatura ambiente y pesarse.
Cálculo: Pérdida de peso seco %= (M1-M2) ÷M×100
Donde: M1: masa de la muestra y del frasco de pesaje antes del secado, g
M2: Masa de la muestra y del frasco de pesaje después del secado, g
M: Masa de la muestra, gramo
5. Rotación específica
-- La rotación específica se mide de acuerdo con GB/T613-1988
Preparación de la muestra: Se pesaron con precisión 0,5000 g de muestra y se transfirieron a una botella volumétrica de 50 ml limpia y seca con 20 ml de acetato de etilo. La botella se tapó con corcho y se agitó para disolver el acetato de etilo.
Prueba: ajuste el cero del giroscopio antes de la prueba, luego llene el tubo de ensayo con la solución de muestra, registre el ángulo de desviación de rotación y calcule la rotación específica de la muestra usando la siguiente fórmula.
[α]20/D= (r×50) ÷(L×A)
donde:
[α]20/D: Rotación específica de la solución de muestra a 25 ℃
r: Rotación observada a 25 ℃ para la solución de muestra
50: Preparar el volumen de solución de muestra (ml)
w: Peso de la muestra (g)
L: Longitud del tubo óptico (dm)
6. Análisis TCL
Preparación de la muestra: se pesaron con precisión 0,5000 g de muestra y se trasladaron a una botella volumétrica de 50 ml limpia y seca, se agregaron 40 ml de EtoH, se tapó la botella y se agitó para disolverla y luego se diluyó a escala con EtoH.
Preparación de la muestra de control: se pesaron con precisión 0,5000 g de muestra y se trasladaron a una botella volumétrica de 50 ml limpia y seca, se agregaron 40 ml de agua y 2 gotas de ácido clorhídrico 6 N, se tapó la botella y se agitó para disolverla y luego se diluyó a la escala con agua. Luego tome 0,5 del líquido anterior y dilúyalo con etanol en una botella de 100 ml de volumen hasta obtener una muestra de referencia con una escala de residuos de aminoácidos del 1,0 %.
Se tomaron muestras de 10 microlitros con una jeringa de micromuestreo y las muestras se colocaron en la placa de silicona GF254. Se tomaron placas de puntos de 5 microlitros, 10 microlitros y 15 microlitros como puntos de comparación, respectivamente.
Agente revelador: n-butanol: ácido acético glacial: agua =4:1:1.
Agente revelador de color: solución de ninhidrina metanol al 5%.
Operación de desarrollo del color: primero, use un secador de pelo para secar la placa de gel de sílice revelada, luego sumérjala en una solución de ninhidrina metanol al 5%, luego séquela y hornee a alta temperatura en un horno eléctrico para el desarrollo del color.
Juicio: observe el tiempo de color del producto, el tamaño de la mancha, la concentración de color y la comparación con el producto de control, juzgue que está en ese rango.