penicilamina
C5H11NO2S 149,21
d-Valina, 3-mercapto-.
d-3-Mercaptovalina [52-67-5].
» La penicilamina contiene no menos del 97,0 por ciento y no más del 102,0 por ciento de C5H11NO2S, calculado sobre la base seca.
Embalaje y almacenamiento- Conservar en recipientes herméticos.
Estándares de referencia USP<11>-
ER Penicilamina USP
ER Penicilina G Potasio USP
ER Disulfuro de Penicilamina USP
C10H20N2O4S2
Identificación-
A: Absorción infrarroja<197M>(50 mg en 300 mg).
B: Disuelva 10 mg en 5 ml de agua y agregue 1 gota de hidróxido de sodio 5 N y 20 mg de ninhidrina: inmediatamente se produce un color azul o azul violeta.
C: Disolver 20 mg en 4 ml de agua, añadir 2 ml de solución de ácido fosfotúngstico (1 en 10) y calentar casi hasta ebullición: se produce inmediatamente un color azul intenso.
Rotación específica<781S>: entre 60,5 y 64,5.
Solución de prueba: 50 mg por ml, en hidróxido de sodio 1,0 N.
pH<791>: entre 4,5 y 5,5, en solución (1 en 100).
Pérdida por secado<731>- Secar unos 100 mg, pesados ​​con precisión, en un frasco con tapón capilar al vacío a una presión que no exceda de 5 mm de mercurio a 60ºC durante 3 horas: no pierde más del 0,5% de su peso.
Residuo de ignición<281>: no más del 0,1%, humedeciendo el residuo carbonizado con 2 mL de ácido nítrico y 5 gotas de ácido sulfúrico.
Metales pesados, Método II<231>: no más del 0,002%.
Límite de actividad de la penicilina-
Tampón pH 2,5- Disolver 100 g de fosfato monobásico de potasio en agua, agregar 0,2 ml de ácido clorhídrico, diluir con agua hasta 1000 ml y mezclar. Ajustar, si es necesario, con ácido fosfórico o con hidróxido de potasio 10 N hasta un pH de 2,5.
Preparación estándar- Prepare como se indica para la penicilina G en la Tabla 1 en Antibióticos-Ensayos microbianos 81, excepto para preparar una solución madre final que contenga 100 unidades de penicilina G por ml y seis diluciones de prueba que van desde 0,005 unidades de penicilina G por ml a 0,2 unidades de penicilina G por ml, y para usar una dosis mediana del estándar de 0,050 unidades de penicilina G por ml.
Preparación de exámenes- Disuelva 1,0 g en agua para obtener 18,0 ml, transfiera 9,0 ml de esta solución a un separador, agregue 20 ml de acetato de amilo y 1 ml de tampón de pH 2,5 y agite. Se deja que las capas se separen y se extrae la capa acuosa en un segundo separador, reteniendo el extracto de acetato de amilo en el primer separador. Verificar el pH de la capa acuosa, y si es mayor a 3,0 ajustarlo con ácido clorhídrico a un pH de 2,5 y extraer con 20 mL de acetato de amilo. Deseche la capa acuosa y agregue el extracto de acetato de amilo al primer separador. Lavar los extractos de acetato de amilo combinados con 10 ml de tampón de pH 2,5 diluido (1 en 10) y desechar la capa acuosa. Extraiga el acetato de amilo con 10,0 ml de tampón n.° 1 (consulte Tampones de fosfato y otras soluciones en la sección Medios y diluyentes en Antibióticos: ensayos microbianos 81). Utilice una porción del extracto tampón como Solución de prueba A. A una porción de 5 ml del extracto, agregue 0,1 ml de solución de penicilinasa e incube entre 36 y 37,5ºC durante 60 minutos (Solución de prueba B).
Preparación de inóculo- Prepárelo como se indica en Antibióticos-Ensayos microbianos 81, utilizando Micrococcus luteus (ATCC 9341) como organismo de prueba y un inóculo que proporcione zonas claras y nítidas de inhibición de 17 mm a 21 mm de diámetro con el nivel de dosis medio del estándar.
Procedimiento- Proceda como se indica para el método Cilindro-Placa en Antibióticos-Ensayos microbianos 81, usando 10 ml de Medio 1 para la capa base y 4 ml de Medio 4 inoculado para la capa de semillas, e incubando las placas de 29 a 31, excepto en cada placa de prueba para llenar 2 cilindros con la Solución de prueba A, 2 cilindros con la Solución de prueba B y 2 cilindros con la dosis media del estándar. Si la solución de prueba A no produce ninguna zona de inhibición, la prueba es negativa para penicilina. Si la solución de prueba A produce una zona de inhibición y la solución de prueba B no, hay penicilina presente. Determine su nivel a partir de la curva estándar: no se encuentran más de 0,01 unidades de penicilina G en cada ml de solución de prueba A (0,2 unidades de penicilina G por g).
Mercurio-
[nota-El ditizonato de mercurio es sensible a la luz. Realice esta prueba con luz tenue.]
Solución madre de ditizona- Disolver 40 mg de ditizona en 1000 ml de cloroformo.
Valorante de ditizona- Diluir 30,0 ml de solución madre de ditizona con cloroformo a 100,0 ml. Esta solución contiene aproximadamente 12 mg de ditizona por litro.
Solución estándar- Transferir 135,4 mg de cloruro de mercurio a un matraz aforado de 100 ml, añadir a volumen ácido sulfúrico 0,25 N y mezclar. Esta solución contiene el equivalente a 100 mg de Hg en 100 ml.
Solución estándar diluida- Pipetear 2 ml de Solución estándar en un matraz aforado de 100 ml, añadir a volumen ácido sulfúrico 0,25 N y mezclar. Cada ml de esta solución contiene el equivalente a 20 µg de Hg.
Estandarización- Pipetee 1 ml de solución estándar diluida en un separador de 250 ml y agregue 100 ml de ácido sulfúrico 0,25 N, 90 ml de agua y 10 ml de solución de clorhidrato de hidroxilamina (1 en 5). Luego agregue 1 ml de solución de edetato disódico (1 en 50), 1 ml de ácido acético glacial y 5 ml de cloroformo, agite durante 1 minuto, deje que se separe y deseche la capa de cloroformo. A la solución se le añade el valorante Ditizona, en porciones de 0,3 ml a 0,5 ml, desde una bureta de 10 ml. Después de cada adición, agite la mezcla 20 veces, permita que la capa de cloroformo se separe y deséchela. Continúe hasta que la adición de valorante Ditizona permanezca verde después de la agitación. Calcule la cantidad, en µg, de mercurio equivalente a 1 ml de valorante de ditizona dividiendo 20 por la cantidad de ml de valorante de ditizona añadidos.
Procedimiento- Transfiera 500 mg de penicilamina a un matraz Kjeldahl de 650 ml que contenga algunas perlas de vidrio, incline el matraz en un ángulo de aproximadamente 45 y agregue 2,5 ml de ácido nítrico a través de un pequeño embudo colocado en la boca del matraz. Deje que la mezcla repose a temperatura ambiente hasta que se desprendan vapores de óxido nitroso y la reacción vigorosa disminuya (de 5 a 30 minutos). Añadir 2,5 ml de ácido sulfúrico a través del embudo y calentar, primero suavemente y luego hasta producir vapores de trióxido de azufre, luego enfriar. Se añaden con cuidado 2,5 ml de ácido nítrico, se calienta nuevamente hasta que se produzcan vapores de trióxido de azufre y se enfría. Repetir el tratamiento con ácido nítrico y calentar, luego enfriar y agregar con cuidado 50 mL de agua, enjuagar el embudo y recoger los enjuagues en el matraz. Retire el embudo, hierva la solución hasta aproximadamente la mitad de su volumen (aproximadamente 25 ml) y enfríe a temperatura ambiente. Transfiera a un separador de 250 ml con ayuda de agua y agregue agua para obtener aproximadamente 50 ml. Agregar 1 mL de solución de edetato disódico (1 en 50) y 1 mL de ácido acético glacial y extraer con pequeñas porciones de cloroformo hasta que el último extracto cloroformo quede incoloro. Deseche el extracto de cloroformo y agregue 50 ml de ácido sulfúrico 0,25 N, 90 ml de agua y 10 ml de solución de clorhidrato de hidroxilamina (1 en 5). Añadir valorante de ditizona, en porciones de 0,3 ml a 0,5 ml, desde una bureta de 10 ml. Después de cada adición, agite la mezcla 20 veces, permita que la capa de cloroformo se separe y deséchela. Continúe hasta que la adición de valorante Ditizona permanezca verde después de la agitación. Calcule la cantidad de mercurio presente: el límite es 10 µg (0,002%).
Límite de disulfuro de penicilamina-
Diluyente, Fase móvil y Solución de resolución-Prepárese según se indica en el Análisis.
Preparación estándar- Disuelva una cantidad pesada con precisión de ER Disulfuro de Penicilamina USP en Diluyente para obtener una solución que tenga una concentración conocida de aproximadamente 0,025 mg por ml.
Preparación de exámenes- Utilice la preparación de ensayo.
Sistema cromatográfico- Proceda como se indica en el Ensayo. Cromatografía la preparación estándar y registra las respuestas del pico de disulfuro de penicilamina como se indica en el Procedimiento: la desviación estándar relativa para inyecciones repetidas no es superior al 2,0 %.
Procedimiento- [nota-Utilice las áreas de los picos donde se indican las respuestas de los picos.] Inyecte por separado volúmenes iguales (aproximadamente 20 µL) de la preparación estándar y la preparación de prueba en el cromatógrafo, registre los cromatogramas y mida las respuestas de los picos de disulfuro de penicilamina. Calcule el porcentaje de disulfuro de penicilamina (C10H20N2O4S2) en la penicilamina tomado por la fórmula:
100(CS/CU)(rU/rS)
en la que CS es la concentración, en mg por ml, de ER Disulfuro de Penicilamina USP en la Preparación estándar, CU es la concentración, en mg por ml, de Penicilamina en la Preparación de prueba, y rU y rS son las respuestas del pico de disulfuro de penicilamina obtenidas de la Preparación de prueba y la Preparación estándar, respectivamente: no se encuentra más del 1,0% de disulfuro de penicilamina.
Ensayo-
Diluyente- Disuelva 1,0 g de edetato disódico en agua para obtener 1000 ml de solución.
Fase móvil- Disuelva 6,9 g de fosfato de sodio monobásico y 0,20 g de 1-hexanosulfonato de sodio en agua para obtener 1000 ml de solución. Ajustar con ácido fosfórico a un pH de 3,0 ± 0,1 y filtrar a través de un filtro adecuado de 1 µm o de porosidad más fina. Realice ajustes si es necesario (consulte Idoneidad del sistema en Cromatografía<621>).
Solución de resolución- Prepare una solución en Diluyente que contenga aproximadamente 1 mg de ER Penicilamina USP y 0,1 mg de ER Disulfuro de Penicilamina USP por ml.
Preparación estándar- Disuelva una cantidad pesada con precisión de ER Penicilamina USP en Diluyente para obtener una solución que tenga una concentración de aproximadamente 1,25 mg por ml.
Preparación del ensayo- Transfiera aproximadamente 125 mg de penicilamina, pesados ​​con precisión, a un matraz aforado de 100 ml, disuélvalos y diluya a volumen con diluyente y mezcle.
Sistema cromatográfico (ver Cromatografía<621>)-El cromatógrafo líquido está equipado con un detector de 210-nm y una columna de 3,9-mm × 30-cm que contiene el relleno L1. El caudal es de aproximadamente 1,6 ml por minuto. Cromatografía la solución de resolución y registra las respuestas como se indica en el Procedimiento: los tiempos de retención relativos son aproximadamente 0,7 para la penicilamina y 1,0 para el disulfuro de penicilamina, y la resolución, R, entre el pico de penicilamina y el pico de disulfuro de penicilamina no es inferior a 3,0. Cromatografía la preparación estándar y registra las respuestas según las indicaciones del Procedimiento: la desviación estándar relativa para inyecciones repetidas no es superior al 1,0 %.
Procedimiento- [nota-Utilice áreas de picos donde se indican las respuestas de picos. ] Inyecte por separado volúmenes iguales (aproximadamente 20 µL) de la preparación estándar y la preparación de ensayo en el cromatógrafo, registre los cromatogramas y mida las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de penicilamina (C5H11NO2S) en la porción de Penicilamina tomada mediante la fórmula:
100C(ru/rS)
en la que C es la concentración, en mg por ml, de ER Penicilamina USP en la Preparación estándar, y rU y rS son las respuestas del pico de penicilamina obtenidas de la Preparación de ensayo y la Preparación estándar, respectivamente.